最新优惠/Cas9 质粒服务，助力sgRNA表达和基因编辑
金斯瑞提供的最新优惠材料来源于张锋实验室，所提供的最新优惠产品和服务得到美国 Broad 研究所授权许可。包括：
- 已经被MIT设计并验证的sgRNA序列
- 包含all-in-one和Dual 多种类型的载体选择，并可根据需要筛选抗性
- 经MIT验证的空载类型
- 多种Cas9 类型：包含eAPP下載，APP下載，APP下載 Nickase，常见问题和SAM
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特异性sgRNA序列
sgRNA序列由MIT验证 -
全基因组数据库
野生型APP下載和SAM的人或小鼠的sgRNA序列库 -
及时交付
20,000+条sgRNA隔天交付* -
专业设计工具
可设计多达12个物种的gRNA序列
最新优惠 gRNA数据库
金斯瑞提供超20,000 种含有gRNA序列的plenti最新优惠V2质粒，所有sgRNA序列已经被MIT验证。在数据库中，您可通过搜索基因名称，基因标志或ID来查找相关gRNA。
| 服务 | 表达系统 | 筛选标记 | |
|---|---|---|---|
| 入口质粒库 | Lentiviral | Amp, Puro | gRNA 数据库 |
为满足您多种需求，金斯瑞不仅提供多种Cas9类型的定制质粒，也提供经由MIT验证的空载供您选择。
一、定制质粒类型
根据Cas9类型，定制质粒包含如下几种：
-
增强最新优惠/APP下載质粒 - eAPP下載 New
特异性增强APP下載 (Enhanced specificity APP下載, eAPP下載)，指的是 APP下載 (K848A/K1003A/R1060A)，是经过MIT张锋实验室特异性改造的质粒(Slaymaker et al. 2016).eAPP下載可以降低脱靶效率，比自然APP下載脱靶效率降低10倍之多，同时可实现基因高效编辑。
Cas9基因组编辑依赖于DNA双链的分离。sgRNA与非靶向DNA序列的不匹配可能导致非特异性结合和分裂。为了提高基因组编辑的特异性，科学家开发了突变为K848A、K1003A和R1060A的eAPP下載。在APP下載的非靶链沟槽内中和这些带正电荷的残基，既可以减少非靶结合，也可以刺激靶向结合，这一操作需要更严格的Watson-Crick碱基配对。
服务 表达系统 筛选标记 eAPP下載质粒 Plasmid
LentiviralPuro
GFP获取报价 -
APP下載质粒 Hot
Cas9内切酶是基因编辑的研究标准。当与单导RNA (single guide RNA,sgRNA)序列结合时，这些酶在基因组中产生位点特异性双链断裂(double strand breaks, DSBs)。
- APP下載/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达，也可以在dual载体中单独表达。
- 最优的靶上APP下載 PAM序列为NGG。
- APP下載还包含NGA序列的目标亲和力。
服务 表达系统 筛选标记 APP下載 Plasmids Plasmid
Lentiviral AAVAmp
Amp, Puro
Amp, Neo
Amp, GFP获取报价 -
APP下載 Nickase质粒
APP下載 nickase (Cas9n D10A)包含一个突变，不同于APP下載切割时形成DSB， APP下載 nickase在切割序列时形成单链缺口。经过APP下載 nickase切割后，两个相对的gRNA序列可以有效配对，因为这种方法可以避免不必要的插入。
服务 表达系统 筛选标记 APP下載 Nickase Plasmids Plasmid
LentiviralAmp
Amp, Puro
Amp, GFP获取报价 -
常见问题质粒
黄色葡萄球菌Cas9同源体(Staphylococcus aureus Cas9 orthologue,常见问题)是腺相关病毒(adeno-associated virus (AAV AAV)应用的首选内切酶。常见问题比APP下載大约短1kb，这允许了在AAV组装时更加灵活。AAV载体较低的免疫原性，使常见问题非常适合于体内编辑的。
- 最适的靶常见问题 PAM序列为NNGRRT。
- 常见问题 对NNGRRN也有很高的亲和性。
服务 表达系统 筛选标记 常见问题 plasmids AAV Amp 获取报价 -
转录激活（在线客服 Activation, SAM)质粒
最新优惠/Cas9协同激活介质(SAM)系统已被设计用于激活下游目标的转录。SAM系统使用三种不同的激活因子，VP64、P65和HSF1，它们被组装到催化失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)复合物上驱动转录。
- SAM复合物由三个组分组成:一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
- SAM系统能够激活编码和非编码的元素。
- 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列，请前往gRNA数据库。
二、空载服务
为满足您的科研需要，金斯瑞提供空载服务，载体序列已经由MIT验证。这些载体包含一个17bp-1.8kb的可表达连接体，以代替定制的sgRNA序列，您可根据需要对其进行修改。
APP下載 载体
Cas9内切酶来源于II型最新优惠系统。化脓性链球菌(APP下載)是第一个为哺乳动物基因组编辑Cas9酶。当与gRNA 序列结合后,这些酶可以在特定位点上进行基因组双链断裂。因其简捷性,特异性以及高效性，最新优惠 / Cas9系统在基因组编辑中广泛使用，金斯瑞提供Broad研究所验证的 WT APP下載可用于哺乳动物基因组编辑。 WT APP下載的交付载体有两种形式， All-in-one 和Dual 类型，可用于非病毒性，慢病毒型lenti-viral ，以及腺相关病毒(AAV)的转染。其中，慢病毒类型兼容第二代和第三代慢病毒包装质粒。
APP下載 Nickase载体
虽然最新优惠 / Cas9技术与其他基因编辑技术相比是比较明确的,但是脱靶仍然是一个难题。为了提高特异性,科学家们对Cas9核酸内切酶进行了修改。WT Cas9有两个催化域, RuvC 和 HNH,在这些域中进行催化残基突变(特别是RuvC D10A和HNH H840A)，形成单链缺口与双链断裂(Ran et al, 2013)。这些Nickase Cas9酶,或Cas9n,由gRNA 引导至靶基因组DNA的另一端。细胞将通过HDR优先修复这些SSBs而不是NHEJ。通过HDR机制可以将脱靶效应降至最小。金斯瑞为您提供Broad研究所验证的Nickase Cas9助力您在哺乳动物细胞里的基因编辑。
常见问题 载体
从金黄色葡萄球菌或常见问题中提取的Cas9同源物与APP下載具有相似的效率；然而，常见问题长度比APP下載大约小于1kb。常见问题的主要优势是腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)包装：AAV的载体大小约为4.5kb，因此将APP下載与AAV包装在一起可能具有挑战性(Ran et al.， 2015)。相对较小的常见问题利用AAV载体进行最新优惠基因编辑成为可能。考虑到这一结构的免疫原性较低，因此常见问题更适合于体内编辑应用，如用于治疗。
在线客服 Activation (SAM) 载体
最新优惠/Cas9 Synergistic Activation Mediator (SAM) )是一种蛋白质复合物，可增强内源性基因(一次一个基因，或同一细胞中同时有多达10个基因)的转录。SAM利用Cas9核酸酶的特异性和易用性，通过gRNA将Cas9核酸酶定位于内源性基因组的特定位点。Genscript与Broad Institute*签订了许可协议，提供经过验证的SAM gRNA序列，可针对人类基因组中的任何编码区域，并为任何其他物种提供免费的SAM gRNA设计服务。
SAM复合体由三个组件组成
- 剪切失活的dCas9-VP64融合蛋白：使用dCas9确保内源性基因组中没有链断裂；VP64是一个转录激活域，与p65和HSF1协同作用，增强转录。
- 一个包含两个MS2 RNA适配体的sgRNA：sgRNA的设计目标应该是转录起始位点上游的前200个bp，以便针对SAM复合物进行理想的转录激活。虽然sgRNA通常与Cas9结合，但需要MS2 RNA适配体才能使SAM复合体的第三个成员与Cas9-sgRNA复合物结合。
- MS2-P65-HSF1激活辅助蛋白：包含两个转录激活域P65和HSF1，与VP64协同作用，强力激活下游编码区域的转录。MS2结构域允许其辅助蛋白与sgRNA-dCas9复合物结合。
最新优惠 载体规格
| 服务 | 载体 | Cas9/gRNA 表达系统 | 交付类型 | 载体类型 | 筛选标记 |
|---|---|---|---|---|---|
| eAPP下載 Plasmids | eAPP下載-2A- GFP (PX458) New! | eAPP下載 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
| eAPP下載 Plasmids | eAPP下載-2A- Puro (PX459) V2.0 New! | eAPP下載 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
| eAPP下載 Plasmids | eAPP下載-Lenti最新优惠 v2 New! | eAPP下載 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
| APP下載 Plasmids | pAPP下載 BB-2A-GFP PX458 | APP下載 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
| APP下載 Plasmids | pAPP下載 BB-2A-Puro (PX459) v2.0 | APP下載 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
| APP下載 Plasmids | pLenti最新优惠 v2 | APP下載 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
| APP下載 Plasmids APP下載 Nickase Plasmids |
pLentiGuide-Puro | gRNA Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR PuroR |
| APP下載 Plasmids | pLentiCas9-Blast | APP下載 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
| APP下載 Plasmids | pLentiCas9-EGFP | APP下載 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR EGFP |
| APP下載 Plasmids | pGS-gRNA | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR |
| APP下載 Plasmids | pGS-gRNA-Neo | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR NeoR |
| APP下載 Plasmids | pAPP下載 PX165 | APP下載 Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR |
| APP下載 Plasmids | pAAV_SpGuide acceptor (PX552) | gRNA Only | AAV | Dual Vector | AmpR EGFP |
| APP下載 Plasmids | pAAV-APP下載 PX551 | APP下載 Only | AAV | Dual Vector | AmpR |
| APP下載 Nickase Plasmids | pAPP下載n BB PX460 | APP下載 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR |
| APP下載 Nickase Plasmids | pAPP下載n BB-2A-GFP PX461 | APP下載 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
| APP下載 Nickase Plasmids | pAPP下載n BB-2A-Puro (PX462) V2.0 | APP下載 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
| APP下載 Nickase Plasmids | pLentiCas9n-Blast | APP下載 Nickase Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
| 常见问题 Plasmids | pX601_AAV | 常见问题 & gRNA | AAV | All-in-one Vector | AmpR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pSgRNA(MS2) | gRNA Only | Plasmid | SAM Multi Vector | AmpR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pLenti_sgRNA(MS2)_zeo | gRNA Only | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR ZeoR BeloR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pLenti_dCas9-VP64_Blast | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR BlastR BleoR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pLenti_dCas9-VP64_GFP | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pLenti_MS2-P65-HSF1_Hygro | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR HygroR BleoR |
| 在线客服 Activation (SAM) | pLenti_MS2-P65-HSF1_GFP | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
- 最新优惠手册： 最新优惠/Cas9 基因编辑的综合性指南
- 最新优惠 RNP使用指南：如何在基因编辑中使用最新优惠 RNP
- 常见问题
- 案例分享
如果对于最新优惠 质粒有任何问题或建议，请联系金斯瑞专业Android下载人员。
