可选效力
分析GS敲除克隆的GS蛋白表达(图2)。
颠末测序验证的两个全等位基因敲除细胞系
逆转录PCR(RT-PCR)
客户指定的目的基因/地域和细胞*
总之,告成靶向GS发作的单克隆已完全验证GS服从的缺失。
交付周期
从一致个细胞库中挑选出另外一个单克隆发给客户。
案例分析
GenCRISPR基因组编辑效力
为了可以高效而准确提供报价,请首先下载并完成询价咨询表,然后填写残缺的询价表颠末邮件发送给我们,我们将在第暂时间内给您答复。
颠末WesternBlot方法验证所选克隆中K-ras基因表达缺失,如图3所示。
颠末FACS验证敲除克隆,必须在宿主细胞中提供与靶蛋白(RNAi或敲除)特异性结合的有效抗体。
邮箱:bioassay@genscript.com.cn;
金斯瑞提供基于GenCRISPR™的基因编辑效力,可以运用任何哺乳动物细胞系,针对任何基因消耗基因编辑的细胞。
定制化knock-out细胞系效力
测序验证1-2个全等位基因敲除细胞系
GenCRISPR_KI点突变询价表
效力内容
图3:缺失克隆挑选
客户指定的目的基因/地域和细胞
难转染细胞转染方法的分析最大化gRNA-Cas9的切割听从。
FACS分析
GenCRISPR™gRNA质粒构建效力,您只需提供靶向基因序列,即可为您全心设计gRNA序列(此项免费),剖析并克隆至您指定的任何载体中。
效力典范
宿主细胞中启动子(Cbh/CMV/EFS)的活性分析最大化gRNA-Cas9的切割听从。
细胞系选项*
图3:K-ras敲除蛋白表达验证
附加效力
颠末对前5个埋伏的脱靶位点中止测序来确定基因敲除克隆
单基因或多基因knock-out细胞系
图3:DG44(GS-/-)的L-谷氨酰胺依赖性
案例分析2
金斯瑞还提供
任何癌细胞系
脂质体转染/慢病毒转染/电转
图2:亲代细胞和K-ras-/-HCT116细胞sanger测序
**根据要求在mRNA或蛋白水平验证全等位基因修饰细胞系。
图2:PCR验证gRNA对
120+种稀有适宜转染的细胞系,包括A549,CHO-K1,HEK293,HEK293T,HT-29,MDA-MB-231,4T1,A20,HCT116,MCF7,MDCK,U937,RPMI8866等
测序验证
采取高通量PCR方法挑选到了200个单克隆,并颠末Sanger测序和RT-PCR验证全等位基因缺失克隆(图3)。
图1:K-ras敲除方法
案例分析3
效力概略
14~24周
16-24周
Westernblot
颠末RT-PCR中止测序,验证敲除克隆在CDS上拔有缺失标记的mRNA水平。
CellPower™过表达动摇细胞系构建效力,帮忙您开拓外源表达目的基因的动摇细胞系。
案例分析1
GenCRISPR™细胞系效力
图1
客户指定的目的基因/地域和细胞*
交付内容**
案例分析2
一个阴性敲除细胞系作为比拟
转染方法优化
概略
120+种稀有适宜转染的细胞系,包括A549,CHO-K1,HEK293,HEK293T,HT-29,MDA-MB-231,4T1,A20,HCT116,MCF7,MDCK,U937,RPMI8866等
CRISPR产品和效力»
图2:在GS敲除细胞裂解液中,anti-GS抗体未检测到谷氨酰胺剖析酶
相关效力
脂质体转染或电转
设计并剖析gRNA,以靶向GS等位基因上的特定地域。用该载体转染DG44细胞,并颠末Sanger测序分析细胞池。
案例分析1
经过序列验证的包罗knock-out克隆的动摇细胞池
*平凡由客户提供细胞系,假设金斯瑞提供细胞系,则需额外收费。且金斯瑞不提供原代细胞、干细胞或IPS细胞的基因编辑效力。
慢病毒转染
配对的gRNAs共转染到Jurkat细胞中,并颠末FACS分选富集。颠末PCR评价缺失效率,根据条带灰度谋略,转染细胞池占21%(图2)。
询价与订购
脂质体转染或电转
在4号外显子中颠末拔有缺失,敲除人类结肠癌细胞HCT116中的K-ras位点,如图1所示。
义务流程
任何细胞系
5-11周
获得了几个单克隆并中止Sanger序列分析。一个单克隆包罗移码突变(图1)。
设计一对gRNA靶定基因组上的基因中止全基因缺失。运用GenCRISPR™技艺优化gRNA对,对Jurkat细胞的切割听从最大(图1)。
定制化knock-in细胞系效力
附加单克隆
两周一次的项目更新
首页»
电话:400-025-8686-5809
为了评价服从丧失,在有或没有谷氨酰胺浓度添加的情况下培养GS敲除克隆(图3)。在没有谷氨酰胺的情况下GS敲除克隆不能生长。在添加谷氨酰胺时GS敲除克隆生长,因此确定GS敲除细胞系的服从缺失。
一个全等位基因敲除细胞系
一个阴性敲除细胞系作为比拟
单基因knock-out动摇细胞系
脱靶分析
金斯瑞提供
在恣意基因组位置拔出或修饰基因
两周一次的项目更新
客户指定的目的基因/地域和细胞*
GenCRISPR_KO细胞系询价表
CRISPR被以为是研讨和创造药物的强大的工具,可以在不引入外来DNA的情况下,以高度定向的办法窜改任何细胞中的任何基因。CRISPR/Cas9相对于过去的基因编辑方法,如TALENs和锌指核酸酶(ZFN)的优点是,它更容易利用,并且在实验双等位基因修正方面具有更高的听从。
单基因knock-out细胞系
附加效力
两周一次的项目更新
10-19周
案例分析3
图1:GS等位基因缺失惹起移码突变
两周一次的项目更新
Knock-out细胞池效力
对Cas9和gRNA递送颗粒中止慢病毒包装,HCT116细胞中止病毒滴度优化。对每个单克隆中止Sanger测序,选择K-ras基因在第4号外显子上敲除的纯合子,如图2所示。
EZknock-out细胞系效力
一个未修饰细胞(或亲代细胞)
颠末WB验证敲除克隆,必须在宿主细胞中提供与靶蛋白(RNAi或敲除)特异性结合的有效抗体。
启动子活性分析